傾聽肺癌臨牀新訴求:EGFR/ALK/ROS1(EAR)同步檢測(技術篇)
時間:2018-11-12來源:艾德生物

       精準醫療將腫瘤基因分型與靶向治療相結合用於肺癌的治療,改變了肺癌臨牀治療的格局。EGFR、ALK、ROS1(EAR)是肺癌靶向治療的重要靶點,EAR基因同步檢測已被歐洲ESMO、中國肺癌診療專家共識等推薦,是讓患者從肺癌精準醫療中獲益的有效策略(EAR同步檢測的臨牀意義詳見http://news.bioon.com/article/6679926.html)。目前應用於腫瘤基因分型檢測的技術衆多,包括實時熒光定量PCR(qPCR)、測序、數字PCR(ddPCR)、基因芯片、熒光原位雜交(FISH)等。而可用於EAR基因同步檢測的高通量檢測技術主要有測序、基因芯片、qPCR等。

       Sanger測序作爲早期的測序技術,依然是基因檢測的金標準,但是由於其檢測靈敏度低,操作複雜,成本高等問題,限制了其臨牀應用。NGS技術的出現使測序成本大大降低,檢測靈敏度和通量有所提高,且“精准医疗”計劃的提出也使得NGS技術受到行業各界的追捧,已成爲目前醫學領域中較爲火熱的研究技術。在高通量測序方面,CFDA先後批准了幾款應用於NIPT的測序儀和檢測試劑,但是在腫瘤檢測方面,由於NGS應用於腫瘤細胞突變檢測的標準化和質量控制尚未形成共識,目前還沒有高通量測序儀和高通量檢測試劑盒獲批,僅允許臨牀試點單位以自制試劑(LDTs)的形式開展檢測服務,可見,國家對於其臨牀的廣泛應用仍持保留態度。此外,高通量測序在成本效益上適合於開發同時檢測多目標基因panel(幾十上百個基因或靶點)產品,但因爲有些位點突變率很低,很難找到足夠的病人開展臨牀試驗,並且檢測結果也無法去驗證,從長遠來看,此類產品很難以獲批,只能以自制試劑(LDTs)的形式在臨檢實驗室使用,短期內還難以實現臨牀的廣泛應用。

       基因芯片技術是在高通量測序技術出現之前被廣泛用於多基因檢測的技術。在腫瘤診斷領域,基因芯片技術通過對腫瘤基因表達譜分析,組成腫瘤基因診斷芯片,研究腫瘤基因的功能,既可用於腫瘤普查又能達到早期診斷和早期治療的目的。但其要成爲臨牀診斷和治療腫瘤普遍採用的技術仍有一些關鍵問題需要解決,如操作繁瑣、成本高和檢測時間長、易出現假陽性,且檢測結果往往還需要測序或定量PCR進行驗證等等。

       相比之下,經典的qPCR技術具備操作簡便、靈敏度高、特異性好、結果判讀簡單等優勢,已成爲臨牀廣泛應用的檢測方法。在檢測通量上,一般認爲qPCR技術受熒光染料種類限制,不適合多基因檢測。然而隨着多重熒光PCR技術的發展、一些創新性的探針和引物設計技術的出現,qPCR平臺已經克服了通量瓶頸。在腫瘤靶向用藥檢測領域,已有創新性的多種基因聯合檢測的產品上市,代表性產品有:人類KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因突變聯合檢測試劑盒、人類ALK基因融合和ROS1基因融合聯合檢測試劑盒等。因此qPCR法是目前較易於臨牀推廣的可用於EAR同步檢測的檢驗方法。

       目前,qPCR平臺技術又包括ARMS(艾德、凱傑)、HRM(爲真)、Taqman(羅氏)等技術,主要差別爲特異性、靈敏度,其中臨牀廣泛應用的依然是ARMS技術。根據2015年EMQN室間質評調查數據(表1)可知,以ARMS技術開發的AmoyDx和Qiagen的商業化試劑盒產品在臨牀上的使用率很高,佔比高達43.81%。

表1  2015 EMQN室間質評活動中使用方法比率

       在肺癌精準醫療的用藥檢測上,CFDA批准的肺癌臨牀用藥檢驗產品有數十個(表2)。從技術上來看,qPCR技術依然是臨牀應用的主流技術,該技術下獲批的肺癌臨牀用藥檢測產品很多,覆蓋了肺癌目前已獲批上市的靶向藥物的所有靶點,並且已有基於ARMS技術的EAR三基因聯合檢測產品上市。

表2  CFDA獲批的的肺癌EGFR、ALK、ROS1基因突變檢測產品

       從臨牀實際應用角度出發,目前已發現的肺癌相關驅動性基因有十多個,並還不斷的有新的靶點被發現出來。各大醫藥企業紛紛佈局臨牀研究,針對這些靶點開發新的靶向藥物。相信隨着肺癌新靶點的發現和新靶向藥物的研發,高通量檢測更多靶點的技術將更有利於肺癌精準醫療決策的制定。我們期待高通量測序技術能解決臨牀應用相關問題、監管機構能通過政策改革,推動LDTs的臨牀應用規範化和標準化建設。同時,也期待有越來越多機構通過技術創新,在適合於臨牀應用的技術平臺上,如qPCR技術平臺,開發出同時檢測更多靶點的檢測產品,協助臨牀制定優異治療方案,爲患者節省寶貴時間。

關於艾德生物(股票代碼:300685)

      艾德生物是集產品研發、生產、銷售和服務爲一體的腫瘤精準醫療專業化診斷公司,爲腫瘤患者提供圍繞腫瘤全病程管理的診斷產品和診斷服務。公司擁有業內國際先進、完全自主知識產權的ADx-ARMS®、Super-ARMS®、ddCapture®、digital dual-direction Capture®等技術平臺,具有獲得NMPA和歐盟CE認證的腫瘤精準診斷產品線。
      在國內外室間質評(EMQN、PQCC等)中,艾德產品連續多年保持優異的準確率和極高的使用率,在全球50多個國家和地區的數百家大中型醫院廣泛應用。同時,公司也與阿斯利康、輝瑞、默克、勃林格殷格翰、Illumina等國際知名企業在腫瘤分子診斷技術領域建立戰略合作伙伴關係,其中ROS1試劑盒已在日本、韓國獲批上市,EGFR試劑盒是中國NMPA按照伴隨診斷試劑標準審評並批准上市的產品。

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